孔径太小□□□□，待测物不易流出□□□，分析时间长□，展宽严重 □□□□□。 孔径太大则很可能导致组分分不开 □□□□。 在做凝胶色谱时□□□□□□，需要先大致估计下待分析物的分子量□，然后选择 合适的柱子□□□□□□，如果不知道粒径□□□□，可先用大孔径的先试试□□□，接着再用 小粒径的以达到更高的精度□□。市售的柱子上都有该柱适用的分子量 范围□□□，一般选待测物分子量在色谱柱的最大分子量的20%-80%宜
填料的孔径太小□，待测物不易流出□□□，分析时间长□□□，展宽严重□；孔径太大则很可能导致组分分不开□□□。在做凝胶色谱时□□，需要先大致估计下待分析物的分子量□□□□，然后选择合适的柱子□，如果不知道粒径□，可先用大孔径的先试试□□□□，接着再用小粒径的以达到更高的精度□。市售的柱子上都有该柱适用的分子量范围□□□，一般选待测物分子量在色谱柱的最大分子量的20%-80%为宜□。
大多数用于HPLC分离的柱填料使用硅胶微粒（作担体）□□□。基于多孔聚会物担体或其它材料的色谱柱也已商品化□，这些非硅胶填料由于有其特殊的应用□□，以后再作讨论□□□。由于硅胶担体与键合的有机表层（如C18或C8）□□□□，应用范围广□□□，我们将作重点讨论□□□□。
图5-1所示为HPLC中常用的几种微粒类型□□。由于全多孔微球很好地兼顾了众多理想的性质□□□：效能□□□□□、样品荷载量□□□□、耐久性□□□、方便性以及有效利用率等□□□□，所以最为常用□□□□。这些微粒有不同的粒径□□□□、孔径和表面积供选择□□□，所以用这些物质能建立各类HPLC方法□□□□。
实心微球型微粒固定相有一实芯核□□□，起作用的是其表面很薄的外壳□。u乐国际，这些硅胶或聚会物基质的微粒□□□，通常为1□□□□.5~2□□.5μm□□，因为其快速传质的动力学过程□□□□□，对大分子有突出的福利效能□□□□。因为这些实心超小微粒的表面积较小□□，样品容量有限□□□□，所以仅适于分析型HPLC□□□□□。这种超小微粒的色谱柱出峰极为尖锐（小体积）□，因此要求所用HPLC仪器的柱外峰展宽因素极小□□□□□，以避免峰展宽□□□。
灌注色谱填料包含孔径达4000~8000A0（艾）的贯穿孔□□，而且在这些贯穿孔网络中还有较小的内联孔（如300~1000A0（艾））□。在高流速时□□，溶质可通过对流和扩散的共同作用□，进入（并离开）该孔结构□□□□。其效果减少了峰展宽□□□，所以大的多孔微粒在柱效方面与小微粒相当□□□□□□，但压力降却小得多□。目前这种类型填料的使用还较少□□□，因此□□□□，其实用性还有待于进一步探讨□□□。不过□□□□，这种填料似乎非常适于大分子如蛋白质的制备分离□□□，用于小分子的日常分析分离则较少□□□□。
颗粒大小（粒度）在HPLC中极为重要□□□□。约5μm的微粒直径很好地兼顾了分析柱的柱效□□□□□、反压和寿命□□。更小的多孔微粒（如3μm）对快速分离很有用□□。小至1□□.5μm的薄壳微粒对极快速地分离蛋白质等大分子较有用□□。较窄的粒度分布（±50%均值）能保证填充床的稳定□、高效和压力降最小□□□□。总的说来□，3或5μm全多孔微球填充HPLC色谱柱□□□□□□，能满足大多数分离的需要□□□，我们推荐大多数的方法建立用这些粒度的色谱柱□□□□□。
表5-1总结了HPLC分离用微粒的理想的物理特性□□□□□，以及它们的重要性□□□。一般使用7~12nm（70~120 A0（艾））孔径的全多孔微粒□□□□□。表面积150~400m2/g的全多孔微粒分离小分子较有利□□□□。表5-2列出一些窄孔径C18商品柱的典型物理性质□□□□□□。对于分子量大于10000Da分子的分离□，需用孔径大于15nm的微粒□□□□□□，使这些溶质容易进入到微孔结构内部的活性表面□。各种情况下□，都应保证溶质在微孔里能迅速扩散与柱效良好□□□。孔径至少是溶质流体动力学直径的4倍□□，才能确保溶质的有限扩散不至于使柱效下降□□□□□。大孔微粒的比表面积有10~150m2/g不等□□□□□□，取决于微孔直径的大小□□□□□；孔径越大表面积越小□□□□□。
孔径□，指的是硅胶表面上的小孔的直径□，是一个平均值□□□□。常规的液相色谱柱都是在硅胶表面健合特定的官能团□□□□□□，孔径的大小影响官能团健合的密度□□□□。同等粒径的硅胶□□□□□，孔径越大□□□□，硅胶的比表面积越小□，硅胶表面健合的官能团密度越低□□□□□，也就是C%越低□□□□□；反之□□，孔径越小□□，比表面积越大□□□，官能团健合的密度越高□□。另外□□□□□□，如果用来分离生物大分子□□□□□，就要选择孔径较大的(例如300A)的填料□，这样才会得到充分的保留□□□□。
