u乐国际色谱b_图文_百度文库

  高压□、高速的现代高效液相色谱仪于1967年面世□□□□□□, 导致高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography□□□□□,HPLC)的产生□□。 薄壳型填料□,柱效 仅每米1000~3000 塔板数 5~10μm球型和无定 型微粒硅胶□□□□□□,每米 5~6万理论塔板数 键合相色谱□□□□□□、离子色谱□、疏水色谱□、亲和色谱□□□、手性色 谱□□、脂质体色谱□、生物膜色谱□□□□□、整体柱色谱□、微径柱和 毛细管柱色谱及液相色谱-质谱联用等 高压□□、高速的现代高效液相色谱仪于1967年面世□□□, 导致高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography□□□,HPLC)的产生□□□□□□。 薄壳型填料□,柱效 仅每米1000~3000 塔板数 5~10μm球型和无定 型微粒硅胶□□□□□□,每米 5~6万理论塔板数 新型分离模式和 方法不断增加 高度均匀甚至单分 散1~3μm硅胶基质 球形填料□□□□□□,达15~30 万理论塔板/m□□□□□。 高压□、高速的现代高效液相色谱仪于1967年面世□□□□□□, 导致高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography□,HPLC)的产生□□□□。 薄壳型填料□□□□□,柱效 仅每米1000~3000 塔板数 5~10μm球型和无定 型微粒硅胶□□□□□,每米 5~6万理论塔板数 新型分离模式和 方法不断增加 高度均匀甚至单分 散1~3μm硅胶基质 球形填料□□□□□□,达15~30 万理论塔板/m□□□□□。 1□□□□□.6□□□□.2□□.高效液相色谱法的特点及与其他色谱法比较 基本特点 1□□□□□. 高效□□□□□□、高速□□□□□、高灵敏度 2□□□□□. 填料粒径和流动相性质影响色谱柱效 3.局限性 操作条件 1□□□□□. 流动相对分离选择性的影响 2□□□. 柱外效应 3□□□□□□. 操作压力 适用范围广 1□□□.6□.3□.高效液相色谱法分类 1□. 2□□□□. 3□□. 4□. 吸附色谱(adsorption Chromatography) 分配色谱(partition Chromatography) 离子交换色谱(ion-Exchange Chromatography) 体积排阻色谱(size Exclusion Chromatography) 需要指出的是每种色谱方法通常存在一种起支配作 用的主要保留机理□□□□□□,但可能还存在次要的其他机理□□□□。 根据固定相和液体流动相相对极性 的差别□□□□,有正相色谱和反相色谱两种色 谱体系或方法□。 反相色谱和正相色谱主要区别是流 动相和固定相的相对极性□□□□□,最初形成于 液液分配色谱□□□□□,现已广泛应用于其他各 种色谱方法□□□□。 1□□□□□□.6□□□□□. 4高效液相色谱仪 现代高效液相色谱使用3~10μ m柱填料□□□,为达到 适用的流动相流速□□□□□,高压泵需提供几十MPa或数百大 气压力的柱前压□□□□□□。因而HPLC仪器比其他类型的色谱仪 要复杂和昂贵□。 1□,2□□□□,3□□□□□,--流动相溶剂储器□□□□□□;4□□□□□,5□□□,6□□,--过滤器□□□;7—溶剂比例调节阀 和混合室□□□□;8—输液泵□□;9—脉动阻尼器□□□□□□;10—放空阀□□;11—过 滤器□;12—反压控制器□□□□□;13—进样阀□□□□□□;14—色谱柱□;15—检测 1□□□□□.6□□□□□.4□□.1□□□.流动相贮器和溶剂处理系统 现代高效液相色谱仪配备一或多个流动相储液器□□□□□, 一般为玻璃瓶□□□□□,亦可为耐腐蚀的不锈钢□□□□、氟塑料或聚 醚醚酮(PEEK)特种塑料制成的容器□□□□。每个储瓶容积 500~2000mL□□□。储液瓶位置要高于泵体□□□□□□,以保持一定的 输液静压差□□□□□□,在泵启动时易于让残留在溶剂和泵体中 微量气体通过放空阀排出□□□。u乐国际, 储器常装有脱除溶剂中溶解的氧□□□□□、氮等气体装置□□□, 这些溶解气可能形成气泡引起谱带展宽□□□□,并干扰检测 器正常工作□□。溶剂脱气主要有两种方法□□□□□□,其一是搅拌 下真空或超声波脱气□□□□;另一种是通入氦或氮等惰性气 体带出溶解在溶剂中空气□□□□。储液器的溶剂导管入口处 装有过滤器□□□,以进一步除去溶剂中灰尘或微粒残渣□□□, 防止损坏泵□□□□□□、进样阀或堵塞色谱柱□□□。 1□.6□□□□.4□.2□□□□□.高压泵系统 通用HPLC仪输液泵系统的基本要求是□□:提供(50500)×105Pa的柱前液压□□□□□;输出无脉动恒定的液流□□□□□;流 速范围0□□□□.1-10mL/min□□□□□□;流速控制精度0□□.5%或更好□□□□□;系 统组件耐腐蚀(密封性良好的不锈钢或氟塑料)□□□□。高压 泵产生的液体高压没有爆炸危险□□□□□,因为液体的压缩性 极小□□□□□□。最重要的是系统密封性能好□。 目前常使用的有三种类型的输液泵□,即往复柱塞 泵□□□□□、气动放大泵□□□□□□、螺旋注射泵□,它们各有优□□、缺点□□。 1□□□□.往复柱塞泵 1□.电机□□□,2□□□□.往复凸轮□□,3□□□□□□.密封柱 塞□□□□□□,4□□□.吸排液单向阀□□□□□,5□□□.溶剂入 口□,6□□.脉动阻尼器□□□,7□□□□.接色谱柱□□□。 2□□□□□□. 其他类型泵 气动放大泵又称为恒压泵□□□□□□,其工作原理与水压机 相似□□□,以低压气体作用在大面积气缸活塞上□□□□□,压力传 递到小面积液缸活塞□□□,利用压力放大获得高压□□。 螺旋注射泵又称为排代泵□□□□,其结构类似于医用注 射器□□□,由一个大体积液体室和柱塞组成□□□,步进电机通 过螺旋杆传动机构推动柱塞输出高压液体□□□。 3□□□□□□.流速控制和程序系统 比例调节阀和混合器□;脉动阻尼器□□□;放空阀□□□□;过 滤器□□□;反压控制传感器等□□□□□□。 1□□□.6□.4□□□□□□.3□□□.进样系统 进 样 阀 高效液相色谱柱比气相色谱柱短得多(约 5~30cm)□□□□□,所以柱外展宽(又称柱外效应)较 突出□□□。柱外展宽是指色谱柱外的因素所引起的 峰展宽□□□,主要包括进样系统□□□□、连接管道及检测 器中存在死体积□。柱外展宽可分柱前和柱后展 宽□□。进样系统是引起往前展宽的主要因素□□,因 此高效液相色谱法中对进样技术要求较严□□□□□□。 动 画 1□□□□□□.6□□□□.4□□□.4□□□□.高效液相色谱柱 色谱柱是液相色谱的心脏部件□□□□,它包括柱管与固定 相两部分□□□□□□。柱管材料有玻璃□□□、不锈钢□□□□□、铝□□、铜及内衬光 滑的聚合材料的其他金属□□□。玻璃管耐压有限□□□□□□,故金属管 用得较多□。一般色谱柱长5~30cm□,内径为4~5mm□□□□,凝 胶色谱柱内径3~12mm□□□□,制备往内径较大□□□□□□,可达25mm 以 上□□□□□□。一般在分离前备有一个前置柱□,前置柱内填充物和 分离柱完全一样□□□□□□,这样可使淋洗溶剂由于经过前置柱为 其中的固定相饱和□□□□,使它在流过分离柱时不再洗脱其中 固定相□,保证分离技的性能不受影响□□。 1□□□□□□.色谱柱类型 按内径大小可大致分为常规分析柱□、制备或半 制备柱□□□□、小内径或微径柱□、毛细管柱四种类型□□。 2□□□□□.保护柱 一般在分析柱前装上较短的保护柱□,不仅可除 去溶剂中的颗粒杂质和污染物□,而且可除去样品中 含有与固定相不可逆结合的组分□□□,以保护较昂贵的 分析柱□□□□□□,延长使用寿命□。 3□□□.柱恒温器 对色谱柱严格控制温度可获得重现性更高保留 值和更好分离色谱图□。 4□□□□□□. 柱填充技术 根据填料粒径大小采用干法或湿法装柱□□□□。粒径大 于20μm□,采用类似气相色谱的干法装柱□,实际上这种 方法己很少使用□□□。 目前大多数采用10μm以下填料□□□□,以称为等密度匀 浆湿法装柱□□□。 注□□□□□□:1□□.高压泵□□□,2□.压力表□□□□□,3□□□□□.排空 气阀□□□□□□,4□□.匀浆罐□□,5□□□□.色谱柱□,6□□□□□.加 压介质瓶□□□□□,7□□□□□.废液杯□□□□□□。 1□□□□□□.6□□□□□□.4□□□.5□□□□.液相色谱检测器 在液相色谱中□,有两种基本类型的检 测器□□□□。一类是溶质性检测器□□,它仅对被分 离组分的物理或化学特性有响应□□,属于这 类检测器的有紫外□□□、荧光□□□□□、电化学检测器 等□□□□□。另一类是总体检测器□□,它对试样和洗 脱液总的物理或化学性质有响应□□□□,属于这 类检测器的有示差折光□,电导检测器等□□□□。 现将常用的检测器介绍如下□: l□□□□□. 光吸收检测器□:紫外吸收检测器□,光二极 管阵列检测器□□□,红外吸收检测器 2□□□□□. 荧光检测器 3□. 示差折光率检测器 4□□□□□□. 蒸发光散射检测器 5□. 电化学检测器 1□□.6□□.4□□.5□.1□□□□.光吸收检测器 1□. 紫外吸收(UV) 检测器 应用最广□□□,对大部分有机化合物有响应□□□□□□。 特点□□□:灵敏度高□□□;线形范围高□□□□□□;流通池可做的很小 (1mm × 10mm □□,容积 8μL)□□;对流动相的流速和 温度变化不敏感□□□;波长可选□□,易于操作□;可用于梯度 洗脱□□□□。 2□□□.紫外光电二极管阵列检测器 紫外检测器的重要进展□□; 光电二极管阵列检测器□□□□□□: 1024个二极管阵列□□,各 检测特定波长□□□□,计算机快速处理□□□□□,三维立体谱图□□,如 图所示□□□□□□。 2□□□□.紫外光电二极管阵列检测器 紫外普通检测器和光电二极管 阵列检测器的比较 普通检测器 光电二极管阵列检测器 3□□. 红外吸收检测器 与一般光吸收检测器光路设计相似□□,其吸收池窗 口采用氯化钠□、氟化钙等红外透明材料□□,透过吸收池 的红外光一般以热电敏感元件接收□。这种检测器可提 供分子结构信息□□□□,但由于大多数液相色谱流动相溶剂 都有红外吸收及窗口材料限制□□,其应用有限□□。 1□□□□□□.6□□□□□□.4□.□□.5□□□□.2□. 荧光检测器(Fluorescence Detector□□□,FD) 高灵敏度□□、高选择性 对多环芳烃□,维 生素B□□□□、黄曲霉素□□□□□□、卟 啉类化合物□□□、农药□□、 药物□□□□□、氨基酸□□、甾类 化合物等有响应□. 1□□□.6□□□.4□□□□□.5□□□.3□. 示差折光检测器(Differential Refrative Index Detector□□, RI) 除紫外检测器之外应用最多的检测器□; 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差 值□□□□。差值与浓度呈正比□□□□□□; 通用型检测器(每 种物质具有不同的折光 指数)□□□□; 灵敏度低□□、对温度 敏感□□□、不能用于梯度洗 脱□□□; 偏转式□□□□□、反射式和 干涉型三种□□; 示差折光检测器光路

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